答疑解惑丨细菌内毒素检测常见问题解答第一弹!

2024-11-11 15:20 小德
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在进行细菌内毒素检测的过程中,技术人员常面临各种挑战与疑问,为解决这些问题,科德角国际汇总了客户咨询的常见问题,并以详尽的问答形式提供了指导性的解答,为相关从业者提供参考。

一、如何溶解细菌内毒素标准品?

对于不同类型的细菌内毒素标准品,其溶解方法有所不同。

▶▶美国药典USP细菌内毒素标准品(USP-RSE):加入5mL细菌内毒素检测用水(2000EU/mL),再剧烈涡旋30分钟。

▶▶科德角国际欧洲药典细菌内毒素参考标准品(BRP):将5mL细菌内毒素检测用水添加到小瓶中。使用涡旋混合器间歇混合30分钟以复溶,以获得初始浓度2000EU/mL的储备溶液。


欧洲药典细菌内毒素参考标准品

▲欧洲药典细菌内毒素参考标准品

▶▶科德角国际ACC细菌内毒素工作标准品(CSE-E0005):加入细菌内毒素检测用水使细菌内毒素初始浓度达到1000EU/mL(具体浓度参考试剂CoA),剧烈涡旋1分钟,静置5分钟,重复5次以充分溶解。


细菌内毒素工作标准品(CSE)

▲细菌内毒素工作标准品(CSE

二、中国药典下的细菌内毒素标准品选择

在中国药典的规定下,进行细菌内毒素检测时应使用药典规定的细菌内毒素标准品,包括USP-RSEEP-BRPCSE以及中国食品药品检定研究院的细菌内毒素国家标准品。

三、凝胶法、浊度法、显色法的区别

凝胶法主要用于半定量分析,而显色法和浊度法则用于定量分析。

显色法和浊度法虽然大体相似,但在检测原理、检测波长、检测试剂、检测范围以及检测成本上均存在差异,因此在选择这两种方法之前,需要根据实际需求进行审慎而合理的考量。

当凝胶法、显色法和浊度法的检测结果出现疑问或争议时,应以凝胶法的结果作为最终的判定依据。

四、检测时必须使用检测专用耗材吗?

在进行细菌内毒素检测时,虽然不必使用专用的检测耗材,但必须使用不含细菌内毒素或β-葡聚糖的器具。

玻璃器具可通过超过250℃的干热灭菌30分钟以上来灭活细菌内毒素,同时需避免使用可能释放微量金属离子(如FeAlGaCr等)影响检测结果的金属器具。

此外,对于一次性塑料器具,除需获得生产商的保证外,还应确认其不受细菌内毒素污染、不吸附细菌内毒素,且洗脱物不含影响检测结果的物质。

五、胃肠道外给药细菌内毒素的限值确定

对于药典中未规定细菌内毒素限值的样品,其限值公式如下:

内毒素限值(EU/mL)= K(EU/kg)/人最大给药量(mL/kg)

其中,K值根据给药途径的不同而有所差异。

频繁或连续注射时,人最大给药量为1小时内注射的最大剂量。

▶▶参考

日本、美国、欧洲药典规定的K值(致热细菌内毒素量)

日本、美国、欧洲药典规定的K值(致热细菌内毒素量)


六、如何计算MVD(最大有效稀释率)?

计算公式如下:

MVD(最大有效稀释率)计算公式.png


▶▶ λ:凝胶法中表示鲎试剂的标示灵敏度,光度法中表示细菌内毒素标准曲线范围的最小浓度。

此外,科德角国际的Pyros Kinetix® Flex细菌内毒素定量检测系统配套软件“PEXS”带有MVD自动计算功能,方便用户进行快速准确的计算。


Pyros Kinetix® Flex细菌内毒素定量检测系统

Pyros Kinetix® Flex细菌内毒素定量检测系统

七、不溶于水的样品检测?

对于不溶于水的样品,如果能溶于1%乙醇或1%DMSO,在进行检测时不会对鲎试剂造成影响。

八、样品保存方法?

保存样品时需注意以下几点:

● 确保样品中无活菌繁殖;

● 细菌内毒素值不会随保存期而发生变化;

● 确保保存容器无细菌内毒素污染,无细菌内毒素吸附,不含影响检测结果的洗脱物。

九、如何调节样品的pH值?

如果样品溶液的pH值不在6.08.0范围内,则需要进行调节以确保检测准确性。细菌内毒素检测的最佳pH值约为7.3,但由于鲎试剂中含有缓冲成分,此该检测在pH6.08.0的范围内均可进行。

对于可稀释的样品,可通过稀释来调整pH值;对于不可稀释的样品,则可在样品溶液中加入稀NaOHHCl溶液来调节pH值。

此外,也可利用缓冲液来稀释样品溶液。为确保调节效果,建议使用按需配制的NaOHHCl溶液来调整pH值。

十、检测用试管可重复使用吗?

检测用试管不可重复使用。稀释或样品保存用试管可在进行250℃超过30分钟的干热灭菌后重复使用。